Diabetologia：激活但功能受损的潜意识Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出去甲自身抗躯到显现出1同型肾病医学疼痛的困难重重率在孩童时期就有很好的描述，多个去甲自身抗躯特征性的孩童中所有70%在血清转换后10年内患上肾病，而随访15年的孩童这一数量增加到84%。相比之下之下，占医学1同型肾病一半以上的同型1同型肾病的发病机制还从未受益充分的科学研究。

越来越多的人开始用到分段系统来定义1同型肾病的困难重重：形态在显现出多种去甲自身抗躯时转回第1先决条件，显现出血糖异常时转回第2先决条件，显现出疼痛时转回第3先决条件。一些多发去甲自身抗躯特征性的形态，在1期和2期，困难重重较太快，并拓展为发病的1同型肾病。我们之前描述了一一组在首次检验到多种去甲自身抗躯样本后仅仅10年无肾病的极太快困难重重者，这一组病症人数少，但特征非常明确。随后，我们发现去甲自身抗原特异性CD8+T线或粒躯底物在困难重重快速的病症中所原则上不存有，但在早先发病和依然存有的肾病病症中所很容易检验到。这有可能表明，与困难重重病症相比之下，这些病症自身免疫底物的恒定增强。

中所期科学研究表明，尽管恒定性T线或粒躯(Treg)数量正常，但肾病病症存有一些功能性缺陷，其中所都有对IL-2的底物能力减少。此外，肾病病症中所的效应CD4+T线或粒躯有可能对恒定更具抵抗性，表现为效应T线或粒躯的减缓减太快，自然消除的Treg和躯外消除的游离Treg，以及抗原经历的CD4+T线或粒躯中所IL-2底物减太快。本科学研究的目的是描述了CD4+恒定性T线或粒躯(Treg)在一小群极快速困难重重者中所的特征，他们的总数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法有：BOX科学研究是一项以人群为基础的垂直科学研究，在21岁以下确诊的病症亲属中所检查1同型肾病的危险因素。我们之前描述了依然快速困难重重者的特征，他们保证多重去甲自身抗躯特征性超过10年，但从未显现出肾病的医学疼痛，太快性或非完成性自身免疫。随后，10名继续保证无肾病并不想提供大量肝脏样本的快速困难重重者不属于T和B线或粒躯功能性比对。在目前的科学研究中所，8名太快困难重重者(SP一组)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的去甲自身抗躯特征性。所有的举例来说都始终保持1同型肾病困难重重的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身抗躯对某些抗原的特征性底物，然而，一名病症已经始终保持2期仅仅6年，但从未显现出医学疼痛，一名病症被诊疗为肾病，该病人72岁，在采集实验样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在建模中所对该游离完成了原则上上指标。受控外周血单个质子线或粒躯(PBMCs)，采用多参数流式线或粒躯法术和T线或粒躯减缓试验指标游离中所Treg的振幅、表同型和功能性。用到FlowSOM和CITRUS(聚类断定、表征和转回)完成无委派聚类比对，指标Treg表同型。

结果：与肥胖症游离相比之下，来自太快困难重重躯的无意识CD4+T线或粒躯的委派聚类标示出，转录的无意识CD4+ Treg振幅增加，与糖皮质激素游离的TNFR相关细胞(GITR)表述增加有关。一名HbA1c升高的病症与困难重重快速者和匹配的对照一组相比之下，Treg谱有所相异。功能性比对表明，与肥胖症游离相比之下，来自快速困难重重躯的Treg介导的CD4+效应T线或粒躯减缓微小受损。表现为对效应CD4+T线或粒躯CD25和CD134表述的减缓增加。

三幅1 深入的表同型比对标示出，CD4+Treg亚同型在太快困难重重配置文件中所增加。由FlowSOM生成的Treg室，挤满在来自所有游离的活CD4+CD45RA -线或粒躯上。根据标记物表述断定出10个元簇:无意识T线或粒躯_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T线或粒躯;HLA-DR + GITR +无意识T线或粒躯;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)用到9个相异Treg标记生成的10个元簇的MST。每个链表均是由一个战斗群(100个战斗群)，巨大的元战斗群(10个元战斗群)在链表一组周围上色。每个链表中所的饼三幅回应单个标记的表述级别。(b)每个元聚类的热三幅，以标示出整躯标记表述。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)生成三幅，以及FlowSOM定位的每个元簇的覆盖层。(e-l)比较丰度为每个metacluster箱线或三幅(丰度> 0.05%)确定为HD和SP一组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T线或粒躯(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T线或粒躯(l)。深蓝色橘色均是由**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 用到CITRUS的预测模同型表明，Treg振幅的增加是困难重重快速的标志。这两项相关联(a - f)和柑橘比对(g-k)比较SP举例来说和匹配的HD举例来说在CD4+CD45RA−T线或粒躯上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会群躯的均是由性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述完成受控，模拟FlowSOM社会群躯。(b) HD(外缘)和SP(黑斑)一组以及游离SP 606(深蓝色)中所CD25+ cd127的振幅汇总三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+相关联子集的箱线或三幅;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)棉花簇球状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述强度后处理，对角突出的簇被定位为SP和HD配置文件之间的相异。(j)箱线或三幅标示出了在SP(黑斑)和HD(灰点)一组中所，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的比较丰度(数量)。(k)直方三幅标示出每个簇的表同型(粉红色)和Treg标记比较表述与背景表述(蓝色);上列，CPUTreg_3;示例一行，CPUTreg_4。背景与所有其他簇中所标记的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅3 与肥胖症献血者相比之下，困难重重快速者无意识treg的GITR增加。每个无意识CD4+T线或粒躯元簇(无意识T线或粒躯_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T线或粒躯;HLA-DR + GITR +无意识T线或粒躯;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个表述标记的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的表述热三幅(sp606不都有在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR表述串联，标示出直方三幅(c)和汇总三幅(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(深蓝色)所有游离都有，p< 0.05(蓝色)游离SP 606和匹配的HD不都有在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR表述，从这两项相关联，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(深蓝色)串联，标示出直方三幅(e)和汇总三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅4 来自快速困难重重的CD4+ treg线或粒躯依靠效应CD4+T线或粒躯的能力减少。SP一组用蓝色的线或和橘色回应，HD一组用黑色的线或和橘色回应，深蓝色的线或/橘色回应游离sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T线或粒躯完成分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标记为CFSE, Treg按观察的数量滴定。用抗CD3 /28微珠再生线或粒躯，人才培养3同月完成流式线或粒躯法术检验。(a-d)与CD4+需要的话者比较应的treg人才培养(游离)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者人才培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE减缓总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓总和。用到特征性对照(转录的响应线或粒躯不含treg)计算减缓总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 效应CD4+T线或粒躯对快速困难重重的T线或粒躯再生的减缓更敏感。SP一组用蓝色的线或和橘色回应，HD一组用黑色的线或和橘色回应，深蓝色的线或/橘色回应游离sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T线或粒躯完成分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标记，treg按观察的数量滴定。用抗CD3 /28微珠再生线或粒躯，人才培养3同月完成流式线或粒躯法术(CD25反染)和线或粒躯因子比对。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同人才培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE减缓百分率(b)。(c,d) CD25减缓百分率(c)和CD134减缓百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养中所的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

推论：我们得出的推论是，来自快速困难重重子的再生无意识CD4+Treg在GITR表述中所受益了扩展和珍贵，强调了大幅度科学研究Treg在1同型肾病风险形态中所的异质性的重要性。

原文典故：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28